FUG系列玻璃臺式反應器使用

接種/分裝

火焰圈保護接種

準備工作：操作人數以3人最佳，非操作人員離開房間，操作人員帶好口罩，隔熱手套；關閉門窗、空調風扇；3人分別負責持接種鉗、傳遞種瓶和接種。
注意：嚴禁帶橡膠或者塑料薄膜手套，一旦發生燒傷會更嚴重。
? 用濕抹布蓋住攪拌電機以及周圍管道，以防止電機和硅膠管被燒壞。
? 向火圈棉花上滴酒精至飽和并置于接種口。
? 關小進氣流量，全開尾氣閥門。
? 預先擰松接種口蓋子。
? 持接種鉗者用接種鉗鉗住接種口蓋子，點燃火圈，用接種鉗擰下接種口蓋子，并置于接種口遠離接種者方向，蓋子內測朝向火焰。
? 傳遞種子瓶者將捆扎棉線解下，如是棉塞，將棉塞外部包裹紗布曲線，遞給接種者。
? 接種者在火焰旁邊取下種瓶紗布或棉塞，火燒種瓶瓶口一圈后緩慢將種子液倒入罐中。然后遞給傳遞種瓶者，同時，傳遞種瓶者將下一瓶種子遞給接種者。
? 所有接種完成后持接種鉗者擰上罐蓋，用濕抹布熄滅火圈，恢復罐壓和通氣并根據工藝設置其他參數和自控。
注意： 預先估計接種時間，保證火焰時間足夠長，如果種瓶數量較多，預先合瓶。
注意：接種速度不宜過快，否則可能會導致種子液溢出，導致無菌失效。
注意：接種后和種瓶上部溫度很高，禁止手持種瓶上部。
注意：嚴禁向燃燒的火圈上添加酒精。
注意：火圈掉落地面后立即用濕抹布覆蓋。

發酵液分裝/蠕動泵接種

發酵液分裝一般在現場操作，需要火焰保護；蠕動泵接種在無菌操作臺進行。
發酵液分裝/蠕動泵接種準備階段需要將無菌快接裝置與補料口連接，用止水夾夾死，末端用紗布和牛皮紙包扎。
? 在無菌操作臺（蠕動泵接種）或者火焰保護下（發酵液分裝）將無菌快接頭兩側牛皮紙和紗布取下，并對接。
? 打開止水夾，用蠕動泵或壓力將種子或者發酵液壓入罐內。
? 接種/分裝結束后發，用止水夾夾住反應器側無菌接頭連接軟管，斷開無菌接頭，并將反應器放回操作臺。
? 連接反應器通氣、溫控、電極等所有需要的連接。
? 控制面板上設置流量到工藝流量，打開空氣進氣管上止水夾，并觀察確認有氣體進入。
? 連接尾氣管路到尾氣緩沖瓶，全開尾氣至過程質譜閥門，通過尾氣閥門控制罐壓在0.03-0.05MPa。
? 待壓力穩定后，小心的打開無菌接頭軟管上的止水夾，將軟管內殘余液體排出然后重新夾死。
? 設置其他參數為工藝參數，并根據需要設置自控。

培養

補料

補料瓶制作

? 棉塞補料瓶：取合適大小方形雙層紗布，中間依照補料硅膠管管徑大小穿孔，瓶內硅膠管長度到平底，將紗布蒙住瓶口，硅膠管置于中央，逐層填充棉花，直到紗布進入瓶內2/3，繼續在瓶口堆棉花，然后扎緊紗布。
注意：棉花不能使用醫用脫脂棉。
注意：瓶內管口要斜切，防止吸附到瓶壁無法出液。
注意；棉花填充松緊程度以拔出棉塞能聽到砰的一聲為好。
? 藍蓋瓶補料瓶：使用藍蓋瓶專用打孔瓶蓋和不銹鋼內蓋，其中內蓋兩接頭朝向外側，單接頭朝向內側。內測連接硅膠管，長度到瓶底；外側與內側硅膠管連通口連接約2米硅膠管，另一口連接約20厘米硅膠管并在末端連接呼吸器。
? 連接補料針頭/無菌快插接頭：將硅膠管出口一側連接補料針頭/無菌快插接頭，并用扎帶或者棉繩扎緊。
? 直接連接發酵罐：補料硅膠管不連接補料針頭/無菌快插接頭而是直接連接到發酵罐，并隨發酵罐一同滅菌。滅菌時，用止水夾夾死硅膠管。

補料瓶的計量

? 記錄空瓶質量（包括棉塞和硅膠管），固體料質量，溶解后質量，消后質量。
? 瓶中溶液質量濃度=固體料質量/（消后質量-空瓶質量）

補料瓶的消毒

? 將補料針裝入無蓋的10mL離心管，在離心管口處對折，用紗布和牛皮紙包扎。
? 在補料管靠近瓶口處用棉線或者止水夾加緊管道。
? 放入滅菌鍋消毒。

針插式補料接口連接

? 擰松補料接口帽。
? 點燃酒精棉球并置于補料口旁邊。
? 擰開補料接口。
? 取出補料針。
? 對準補料硅膠墊中心位置，豎直扎入。
? 熄滅酒精棉球。
? 用就行棉球塞住補料針周圍位置。
? 管道裝入蠕動泵并加緊。
? 打開止水夾即可按工藝補料。
注意：消泡和pH控制的補料瓶制作同上，以下不再敘述。氨水、甲醇等易揮發物質不能進行高溫消毒。
5L玻璃反應器只有一個針插式補料接口，一批發酵多次使用會增加染菌幾率。

無菌快插接頭連接

? 在火焰保護下，連接無菌快插接頭并固定。
? 打開止水夾即可按工藝補料。

自動/手動補料

? 手動補料：按下面板上手動補料按鈕，補料泵將持續轉動，直到到達所需補料量。
? 自動補料：按下面板上自動補料按鈕，補料泵將按照設定的占空比控制泵的開停。

換料

? 當一瓶補料接近用完時，在控制面板上停止自動或者手動補料。
? 如果有對應的稱重計量，將累計按鈕復位。
? 將補料管用止水夾夾住并從蠕動泵上取下。
? 按照上述方法將一瓶新的補料連接到補料接口上。
? 如果有對應的稱重計量，將新的補料瓶放置到原來的電子秤上并將累計按鈕置位。
? 繼續按照工藝補料。
注意：如果沒有按照要求置為或者復位累計按鈕，會使得補料累計不準確。
注意：5L罐只有一個針插式補料接口，多次使用此接口會增大染菌概率，5L罐應盡量避免換料。

消泡

? 手動消泡，按下面板上手動按鈕，消泡泵將持續轉動泵入消泡劑。
? 自動消泡，連接好液位傳感器，當有泡沫時，系統報警，同時啟動消泡泵，按照設定的占空比補加消泡劑。
? 作為補料，按下消泡模式，可將消泡泵作為補料泵使用，方法同上所述。

pH控制

? 首先確定發酵過程中pH控制方向，在面板上確認控制方式。
? 連接好酸（堿），點下面板上的pH自動。當pH向控制方向的反方向偏移超過設定值后，就會自動補加酸（堿）。

取樣

準備工作

? 發酵罐準備階段，按照下圖示意，連接軟管2和5，并用止水夾夾住5的末端。
? 如果發酵液中有固體，并且可能堵塞取樣口，則將1和2斷開，將1封堵，將過濾器到發酵罐之間軟件加裝三通，額外的開口與2斷開側連接，滅菌時用止水夾夾住三通到3之間的軟管。

取樣

? 取樣前首先用止水夾夾住圖中2所示軟管，小心打開軟管5的止水夾，即可完成取樣。

取樣結束

? 打開軟管2止水夾，罐體頂部的空氣就可將取樣管內殘余的液體排出。

結束

停止發酵

? 用止水夾夾死過濾器到罐體之間管路。
? 關閉所有自控（溫度、pH、流量、攪拌、DO）
? 尾氣緩沖瓶排氣閥門全開，到質譜閥門關閉。
? 壓力表讀數到零后，斷開排氣管路和尾氣緩沖瓶的連接，空氣進氣管和發酵罐的連接以及循環水接頭與控制柜的連接。
注意：禁止帶壓狀態斷開空氣進氣管或者關閉空氣。
? 取下攪拌電機，妥善放置。
? 小心的取出pH和DO電極，清洗后妥善放置。

滅活發酵液

? 依次擰下罐蓋固定螺絲，小心的取出罐蓋。
? 根據需要將發酵液滅活處理。

清洗

? 玻璃罐體內外洗干凈，對于有夾套的罐體，從上排水口進水將夾套底部可能的沉積物清理干凈。
? 將罐蓋部分包括擋板、槳葉、軸封等位置用毛刷清理掉發酵液殘余，并沖洗干凈。
? 取下接種補料復用接口，清洗干凈。
? 清洗電極接口、空氣分布器等。
? 清洗其余部分。
? 清洗完成后將反應器組裝復位。